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  • ISSN 1007-6336
  • CN 21-1168/X

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我国近海河豚毒素的分布特征

姚敬元 金薇 宫长宝 贾宝林 隋世峰 梁玉波 吕颂辉

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我国近海河豚毒素的分布特征

    作者简介: 姚敬元(1982-),女,辽宁大连人,博士,主要从事海洋生物毒素标准物质研究,E-mail:jyyao@nmemc.org.cn;
    通讯作者: 梁玉波(1962-),男,研究员,博士,主要从事海洋生物毒素研究,E-mail:ybliang@nmemc.org.cn 吕颂辉(1963-),男,教授,博士,主要从事海洋赤潮生态研究,E-mail:lusonghui1963@163.com
  • 基金项目: 国家重点研发计划项目(2016YFF0201104,2017FYC1404303);国家自然科学基金项目(41576120,41276099);国家海洋局海洋赤潮灾害立体监测技术与应用重点实验室开放基金项目(MAYTHAB201605);国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室开放基金项目(201613)
  • 中图分类号: X174

Distribution characteristics of tetrodotoxin in the coastal waters of China

  • 摘要: 河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)易富集于河豚鱼和螺类体内,在我国沿海食用螺类中毒事件常有发生。在我国近海采集螺类及河豚鱼样品,采用液相色谱-串联质谱法检测河豚毒素。2018年,在浙江和江苏近海织纹螺(Nassarius spp.)体内多检出河豚毒素,在福建宁德东风螺(Babylonia sp.)体内含量最高,为5.35 mg/kg。我国螺类河豚毒素污染主要分布于福建、浙江和江苏近岸海域,且春、夏季是毒素污染高发期;在山东近海偶有检出;在辽宁、广东、广西和海南近海未检出。天津和辽宁近海河豚鱼体内河豚毒素含量较高。
  • 图 1  中国近海河豚毒素调查站位

    Figure 1.  Investigation sites for tetrodotoxin in coastal waters of China

    表 1  螺类体内TTX含量

    Table 1.  TTX content in snail

    采样地点采样时间样品名称TTX/mg·kg−1
    辽宁(5)丹东2018-08-20海螺Busycon canaliculatuND
    丹东2018-08-20玉螺Natica sp.ND
    丹东2018-11-13荔枝螺Thais sp.ND
    庄河2018-11-13海螺Busycon canaliculatuND
    庄河2018-08-25香螺Neptunea sp.ND
    山东(2)蓬莱2018-11-23红螺Rapana sp.2.53
    威海2018-11-23香螺Neptunea sp.ND
    江苏(7)连云港2018-05-07织纹螺Nassarius sp.ND
    连云港2018-05-07节织纹螺Nassarius hepaticusND
    连云港2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
    连云港2018-11-23扁玉螺Neverita didymaND
    南通2018-05-07织纹螺Nassarius sp.3.54
    南通2018-05-07光织纹螺Nassarius dorsatusND
    南通2018-11-23锈凹螺Chlorostoma rusticaND
    浙江(15)舟山2018-05-08织纹螺Nassarius sp.2.40
    舟山2018-05-08荔枝螺Thais sp.ND
    舟山2018-09-04锈凹螺Chlorostoma rusticaND
    舟山2018-11-08单齿螺Monodonta labioND
    台州2018-05-10梨形乳玉螺Polinices mammillaND
    台州2018-05-10织纹螺Nassarius sp.3.53
    台州2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
    台州2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
    台州2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
    台州2018-11-12梨形乳玉螺Polinices mammillaND
    台州2018-11-12荔枝螺Thais sp.ND
    温州2018-05-10古氏滩栖螺Batillaria cumingiND
    温州2018-08-22织纹螺Nassarius sp.ND
    温州2018-08-22织纹螺Nassarius sp.ND
    温州2018-11-21钉螺Oncomelania sp.ND
    福建(17)宁德2018-05-11东风螺Babylonia sp.5.35
    宁德2018-05-11荔枝螺Thais sp.ND
    宁德2018-05-11单齿螺Monodonta labioND
    宁德2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
    宁德2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
    宁德2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
    宁德2018-11-13镶珠隐螺Clanculus margaritariusND
    宁德2018-11-13荔枝螺Thais sp.ND
    莆田2018-05-11东风螺Babylonia sp.3.44
    莆田2018-05-11锈凹螺Chlorostoma rusticaND
    莆田2018-05-11单齿螺Monodonta labioND
    莆田2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
    莆田2018-08-30织纹螺 Nassarius sp.ND
    莆田2018-11-14单齿螺Monodonta labioND
    莆田2018-11-14荔枝螺Thais sp.ND
    厦门2018-08-20钉螺Oncomelania sp.ND
    厦门2018-11-14单齿螺Monodonta labioND
    广东(5)汕头2018-11-15香螺Neptunea sp.ND
    汕尾2018-11-22荔枝螺Thais sp.ND
    深圳2018-11-16钉螺Oncomelania sp.ND
    阳江2018-05-08古氏滩栖螺Batillaria cumingiND
    阳江2018-11-17梨形乳玉螺Polinices mammillaND
    海南(2)海口2018-11-19钉螺Oncomelania sp.ND
    三亚2018-11-20荔枝螺Thais sp.ND
    广西(1) 北海 2018-11-29 荔枝螺Thais sp. ND
    注:ND为未检出
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    表 2  河豚鱼肝脏中TTX含量

    Table 2.  TTX content in liver of puffer fish

    采样地点采样时间样品名称TTX含量/mg·kg−1
    天津(2)2017-05-28东方鲀Takifugu sp.9.1
    2017-05-28东方鲀Takifugu sp.28.35
    辽宁(4)獐子岛2017-05-28东方鲀Takifugu sp.28.35
    獐子岛2017-05-28东方鲀Takifugu sp.3.615
    獐子岛2019-03-07东方鲀Takifugu sp.3.35
    獐子岛2019-03-07东方鲀Takifugu sp.620
    注:ND为未检出
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2019-12-18
  • 录用日期:  2020-01-30
  • 刊出日期:  2021-04-20

我国近海河豚毒素的分布特征

    作者简介:姚敬元(1982-),女,辽宁大连人,博士,主要从事海洋生物毒素标准物质研究,E-mail:jyyao@nmemc.org.cn
    通讯作者: 梁玉波(1962-),男,研究员,博士,主要从事海洋生物毒素研究,E-mail:ybliang@nmemc.org.cn
    通讯作者: 吕颂辉(1963-),男,教授,博士,主要从事海洋赤潮生态研究,E-mail:lusonghui1963@163.com
  • 1. 暨南大学 生命科学与技术学院,广东 广州 510632
  • 2. 国家海洋环境监测中心,辽宁 大连 116023
  • 3. 大连市藻毒素重点实验室,辽宁 大连 116023
  • 4. 大连理工大学 环境学院,辽宁 大连 116024
基金项目: 国家重点研发计划项目(2016YFF0201104,2017FYC1404303);国家自然科学基金项目(41576120,41276099);国家海洋局海洋赤潮灾害立体监测技术与应用重点实验室开放基金项目(MAYTHAB201605);国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室开放基金项目(201613)

摘要: 河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)易富集于河豚鱼和螺类体内,在我国沿海食用螺类中毒事件常有发生。在我国近海采集螺类及河豚鱼样品,采用液相色谱-串联质谱法检测河豚毒素。2018年,在浙江和江苏近海织纹螺(Nassarius spp.)体内多检出河豚毒素,在福建宁德东风螺(Babylonia sp.)体内含量最高,为5.35 mg/kg。我国螺类河豚毒素污染主要分布于福建、浙江和江苏近岸海域,且春、夏季是毒素污染高发期;在山东近海偶有检出;在辽宁、广东、广西和海南近海未检出。天津和辽宁近海河豚鱼体内河豚毒素含量较高。

English Abstract

  • 河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种非蛋白小分子,热稳定性强,无色无味,为毒性极强的神经类毒素,其起源仍不清楚,海洋细菌等可能产生这一毒素[1-2]。TTX最早发现于河豚鱼体内,在其他动物如蝾螈、虾虎鱼、青蛙、章鱼、螺类、海星、螃蟹等体内也有检出[3-4]。TTX可通过食物链传递,在一些海洋动物体内可大量富集[4]。人们食用TTX及其衍生物污染的海产品后会出现中毒现象,如唇舌麻痹、头晕头痛、恶心呕吐、运动及语言功能紊乱、心率紊乱、呼吸衰竭,甚至死亡[3]。TTX的致死效力为5000~6000 MU/mg,对人类的最低致死剂量约为10000 MU(≈2 mg)[3]。欧洲食品安全局(European Food Safety Authority)评估双壳贝类中TTX的中毒风险时认为,当TTX浓度低于44 µg/kg时不会对人体造成不良影响[5]。建议我国沿海地区螺类体内TTX的安全食用限量为0.05 mg/kg[6]

    近40 年来,在亚洲、欧洲、大洋洲的多个国家和地区贝类中检出TTX,由螺类引发的中毒事件不断发生。1979年、1982年和1987年,日本发生多起因食用含有TTX的法螺(Charonia sauliae)而中毒的事件[3, 7]。2007年,葡萄牙南部海域的法螺在西班牙被食用后引发TTX中毒事件[8]。2009年于新西兰的奥克兰附近海湾,14条狗因食用含有TTX的蛞蝓而中毒死亡[3];2011年、2014年和2017年于牡蛎等双壳贝类体内再次检出[9]。2014年越南的榧螺(Oliva sp.)以及2012年希腊、2013-2015年英国、2015-2017年荷兰和意大利等沿岸海域的贻贝、牡蛎等贝类体内均检出TTX,螺类体内的TTX浓度远高于双壳类[9]。1994-2006年,我国台湾地区发生9例螺类中毒事件,多因食用了织纹螺(Nassarius sp.)[7, 9]。1977-2004年,从我国福建到青岛沿海地区,因食用含有TTX的螺类已引发了400多例中毒事件[3, 9]

    TTX主要富集在螺类和河豚鱼体内,本研究在全国沿岸海域采集了春、夏、秋季样品,进行TTX的分析,旨在为科学评估我国近海TTX的染毒状况提供依据。

    • 无水甲醇(CH3OH)和乙酸(CH3COOH)为分析纯,购自天津市科密欧化学试剂公司;乙腈为色谱纯,购自德国默克公司;甲酸(CHOOH)为色谱纯,购自上海安谱实验科技股份有限公司;甲酸铵为色谱纯,购自美国如意科技有限公司;色谱仪器用水均为蒸馏水,购自屈臣氏公司;0.22 μm 孔径滤膜购自上海兴亚净化材料厂;TTX参考物质购自河北省水产科技开发公司。

    • 2018年5月、8月、9月和11月,54份螺类样品采自中国近海:辽宁丹东、庄河,山东蓬莱、威海,江苏连云港、南通,浙江舟山、台州、温州,福建宁德、莆田、厦门,广东汕头、汕尾、深圳、阳江,海南海口、三亚,广西北海,共19个站位(图1)。样品采集后放置在含有冰袋的保鲜盒内,封好后尽快运回实验室,用自来水将泥沙冲洗掉,将螺中的软组织全部取出,充分均质,装入自封袋中冷冻保存。

      图  1  中国近海河豚毒素调查站位

      Figure 1.  Investigation sites for tetrodotoxin in coastal waters of China

      提取过程:室温解冻,称取2 g(精确到0.01 g)匀浆试样于15 mL离心管中,加入4 mL乙酸-甲醇溶液(vv,1∶99),涡旋振荡2 min,50 ℃水浴超声提取15 min,以8000 r/min离心5 min,转移上清液于10 mL容量瓶中。重复提取一次,合并上清液,用乙酸-甲醇溶液定容至10 mL,取5 mL溶液加入5 mL二氯甲烷脱脂后,取上层水相0.5 mL,用0.22 μm 孔径滤膜过滤,用于分析TTX。

    • 2017年5月采自天津和大连獐子岛、2019年3月采自大连獐子岛的河豚鱼样品,冷冻保存于实验室。

      提取过程:室温解冻,用水清洗鱼体表面,滤纸吸干鱼体表面水分,分解鱼体,取肝脏部分,洗去血污,滤纸吸干表面水分,剪碎组织后均质,按照1.2中方法提取TTX。

    • 采用高效液相色谱(Ultimate 3000,Thermo)-串联质谱仪(API 4000,AB)分析样品中的TTX,色谱柱为Welch Ultimate® HILIC Amide(4.6×250 mm,5 μm)。流动相A:含5 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸水溶液;流动相B:乙腈。洗脱程序:初始为10% A相,保持2 min;2.1~6 min为90% A相等度洗脱,6.1~8 min为 10% A相。流速0.3 mL/min。柱温40 ℃。API 4000串联质谱检测系统,电喷雾离子源电压4800 V,温度350 ℃,阳离子多重反应监测模式(MRM),监测TTX的离子对(320>162/302)。采用TTX外标法,通过软件Analyst(1.5.1版,AB SCIEX,Framingham,MA,USA)处理数据。

    • 本次调查结果显示,福建宁德和莆田、浙江台州和舟山、江苏南通、山东蓬莱近海的螺类体内有TTX检出(表1)。

      采样地点采样时间样品名称TTX/mg·kg−1
      辽宁(5)丹东2018-08-20海螺Busycon canaliculatuND
      丹东2018-08-20玉螺Natica sp.ND
      丹东2018-11-13荔枝螺Thais sp.ND
      庄河2018-11-13海螺Busycon canaliculatuND
      庄河2018-08-25香螺Neptunea sp.ND
      山东(2)蓬莱2018-11-23红螺Rapana sp.2.53
      威海2018-11-23香螺Neptunea sp.ND
      江苏(7)连云港2018-05-07织纹螺Nassarius sp.ND
      连云港2018-05-07节织纹螺Nassarius hepaticusND
      连云港2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
      连云港2018-11-23扁玉螺Neverita didymaND
      南通2018-05-07织纹螺Nassarius sp.3.54
      南通2018-05-07光织纹螺Nassarius dorsatusND
      南通2018-11-23锈凹螺Chlorostoma rusticaND
      浙江(15)舟山2018-05-08织纹螺Nassarius sp.2.40
      舟山2018-05-08荔枝螺Thais sp.ND
      舟山2018-09-04锈凹螺Chlorostoma rusticaND
      舟山2018-11-08单齿螺Monodonta labioND
      台州2018-05-10梨形乳玉螺Polinices mammillaND
      台州2018-05-10织纹螺Nassarius sp.3.53
      台州2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
      台州2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
      台州2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
      台州2018-11-12梨形乳玉螺Polinices mammillaND
      台州2018-11-12荔枝螺Thais sp.ND
      温州2018-05-10古氏滩栖螺Batillaria cumingiND
      温州2018-08-22织纹螺Nassarius sp.ND
      温州2018-08-22织纹螺Nassarius sp.ND
      温州2018-11-21钉螺Oncomelania sp.ND
      福建(17)宁德2018-05-11东风螺Babylonia sp.5.35
      宁德2018-05-11荔枝螺Thais sp.ND
      宁德2018-05-11单齿螺Monodonta labioND
      宁德2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
      宁德2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
      宁德2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
      宁德2018-11-13镶珠隐螺Clanculus margaritariusND
      宁德2018-11-13荔枝螺Thais sp.ND
      莆田2018-05-11东风螺Babylonia sp.3.44
      莆田2018-05-11锈凹螺Chlorostoma rusticaND
      莆田2018-05-11单齿螺Monodonta labioND
      莆田2018-08-30织纹螺Nassarius sp.ND
      莆田2018-08-30织纹螺 Nassarius sp.ND
      莆田2018-11-14单齿螺Monodonta labioND
      莆田2018-11-14荔枝螺Thais sp.ND
      厦门2018-08-20钉螺Oncomelania sp.ND
      厦门2018-11-14单齿螺Monodonta labioND
      广东(5)汕头2018-11-15香螺Neptunea sp.ND
      汕尾2018-11-22荔枝螺Thais sp.ND
      深圳2018-11-16钉螺Oncomelania sp.ND
      阳江2018-05-08古氏滩栖螺Batillaria cumingiND
      阳江2018-11-17梨形乳玉螺Polinices mammillaND
      海南(2)海口2018-11-19钉螺Oncomelania sp.ND
      三亚2018-11-20荔枝螺Thais sp.ND
      广西(1) 北海 2018-11-29 荔枝螺Thais sp. ND
      注:ND为未检出

      表 1  螺类体内TTX含量

      Table 1.  TTX content in snail

      本次调查TTX最高值出现在2018年5月福建宁德近海的螺类体内,浓度为5.35 mg/kg(表1)。1989-2010年,福建宁德共发生织纹螺中毒累计79人,10人死亡[10]。2003年4-5月,在福建宁德和厦门水产品市场共收集螺类样品26份,螺类体内TTX及其衍生物的最高含量为9.46 mg/kg[9],出现在福建宁德地区[11]。2006年,罗璇等[12-13]在福建宁德地区调查时发现,螺类体内TTX浓度最高为3.24 mg/kg。另外,本次调查发现福建莆田的东风螺(Babylonia sp.)体内TTX含量为3.44 mg/kg,高于以往该地区历史数据。2006年3月采自福建莆田的织纹螺体内TTX浓度最高为0.882 mg/kg [12]。2006年5月采自莆田的织纹螺体内TTX浓度范围为0.64~0.88 mg/kg[13]。2013年和2014年,污染较为严重的是莆田的织纹螺,TTX浓度最高为0.509 mg/kg[14]

      2018年5月,浙江省台州、舟山的螺类体内TTX含量分别为3.53 mg/kg和2.40 mg/kg(表1)。1977-2001年,浙江舟山市织纹螺中毒累计310人,死亡16人[3]。1985-2000年,浙江宁波市有59人因食用织纹螺中毒,其中18人死亡[13]。2006年,采自浙江舟山、宁波的织纹螺体内TTX浓度范围分别为0.64~1.28 mg/kg、0.48~0.50 mg/kg[13]。2012年,浙江温州瑞安发生食用织纹螺中毒事件,21人中毒,1人死亡[10]。2013-2015年,舟山、宁波、台州农贸市场的织纹螺体内TTX浓度范围分别为0.07~7.4 mg/kg、0.04~3 mg/kg、1.18~1.46 mg/kg,而温州的织纹螺体内TTX浓度最高,达15.75 mg/kg[10]

      2018年5月,在江苏南通的螺类体内TTX含量为3.54 mg/kg(表1)。1991-2004年,江苏连云港地区因食用织纹螺中毒累计82人,10人死亡,确定是由TTX污染引起的[15]。2006年5-6月,江苏盐城的织纹螺体内TTX含量为0.72~0.98 mg/kg,而2007年连云港的织纹螺体内TTX浓度范围为30.38~132.8 mg/kg[13]

      2018年11月,山东蓬莱的螺类体内TTX含量为2.53 mg/kg(表1)。2002年7月,山东青岛发生3例因食用螺类而中毒的事件[3]。本调查首次在山东蓬莱的螺类样品中检测到TTX。

      除上述4省近海螺类体内检出TTX外,在辽宁、广东、广西和海南等近海螺类体内,未检出TTX。

    • 本调查检出TTX的螺类主要包括:2018年5月的织纹螺和东风螺以及2018年11月的红螺(Rapana sp.)(表1)。

      TTX已在螺类的多个种属中检出。1980-2018年,中国东海沿岸、中国台湾、日本、葡萄牙和越南的东风螺、织纹螺、红螺、榧螺、法螺、玉螺(Natica sp.)、乳玉螺(polinices sp.)、狗岩螺(Nucella lapillus)、土发螺(Tutufa sp.)、驼峰螺(Gibbula sp.)、中华海因螺(Hindsia sinensis)、结节竖琴螺(Harpa articularis)、台湾䗉螺(Umbonium suturale)等螺类体内检测到TTX[7, 9]。目前我国东海沿岸地区的螺类中毒事件主要是由染TTX的食腐性小型织纹螺引起的[9],福建市售织纹螺体内TTX检出率最高[14]

      含有高浓度TTX的食腐性织纹螺多出现在春、夏季。1989年4月,在台湾地区红螺(Rapana rapiformis)的消化腺中,TTX最高浓度为28 mg/kg,而1988年10月和1989年6月在红螺(Rapana venosa)消化腺中TTX最高浓度分别为2.6 mg/kg和2.4 mg/kg[16]。2002年5月,福建红带织纹螺体内TTX最高浓度为44.6 mg/kg[17];2003年5月,福建宁德的织纹螺体内TTX及其衍生物的最高浓度为9.46 mg/kg[11];舟山地区的织纹螺中毒高峰出现在夏季(6-8月)[12]。2003年6月,江苏半褶织纹螺体内TTX最高浓度为129 mg/kg[17];2007年5月,江苏连云港的织纹螺体内TTX浓度高达132.8 mg/kg[13]。本研究在6份螺类样品中检测到TTX,其中5份螺类样品采自2018年5月,浓度范围为2.40~5.35 mg/kg(表1)。

      食肉或食腐的螺类一般生活在海底,有些种类喜欢以产卵后死亡的有毒河豚内脏为食,从而积累TTX[3]。因此,小型螺类的高毒性可能与有毒河豚鱼产卵季有关。本研究于2017年和2019年的3月和5月,在黄、渤海采集的河豚鱼体内均检出毒素,个体越大毒素含量越高,肝脏中TTX浓度范围为3.35~620 mg/kg(表2)。

      采样地点采样时间样品名称TTX含量/mg·kg−1
      天津(2)2017-05-28东方鲀Takifugu sp.9.1
      2017-05-28东方鲀Takifugu sp.28.35
      辽宁(4)獐子岛2017-05-28东方鲀Takifugu sp.28.35
      獐子岛2017-05-28东方鲀Takifugu sp.3.615
      獐子岛2019-03-07东方鲀Takifugu sp.3.35
      獐子岛2019-03-07东方鲀Takifugu sp.620
      注:ND为未检出

      表 2  河豚鱼肝脏中TTX含量

      Table 2.  TTX content in liver of puffer fish

    • (1)福建、浙江和江苏近海螺类体内TTX污染依然较重,春、夏季是毒素污染高发期;山东近海螺类体内偶有TTX检出;

      (2)辽宁、广东、广西和海南近岸海域螺类体内尚未检出TTX。辽宁和天津近海河豚鱼体内毒素含量较高。

参考文献 (17)

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