• 中文核心期刊
  • 中国科技核心期刊
  • ISSN 1007-6336
  • CN 21-1168/X

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

微塑料胁迫对近江牡蛎免疫及抗菌力的影响

牟红莉 王瑞旋 林小植 王俊 王江勇

引用本文:
Citation:

微塑料胁迫对近江牡蛎免疫及抗菌力的影响

    作者简介: 牟红莉(1996-),女,四川眉山人,硕士研究生,主要从事微塑料对贝类的污染研究,E-mail: 2797678008@qq.com;
    通讯作者: 王瑞旋,女,副研究员,主要从事贝类微生态研究,E-mail: wangruixuan@scsfri.ac.cn
  • 基金项目: 国家自然科学基金项目(31902416)
  • 中图分类号: S917.4;X171.5

Effects of microplastics stress on the immunity and antibacterial activity of Crassostrea ariakensis

  • 摘要: 为探究微塑料对近江牡蛎 (Crassostrea ariakensis)免疫及抗菌力的影响,本研究将不同浓度(0.05 mg/L、0.5 mg/L、5 mg/L)的聚苯乙烯微塑料—菌悬液注入牡蛎壳腔内,研究牡蛎在胁迫24 h和72 h后鳃组织中6种免疫指标的活力,同时记录死亡率。结果显示,微塑料胁迫24 h后,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力随暴露浓度的升高而升高,但一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,A-chE)随暴露浓度升高被显著抑制,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活力仅在0.5 mg/L处理下显著上升,过氧化氢酶(catalase,CAT)的活力呈现先上升再下降后上升的趋势。微塑料胁迫72 h后,CAT、AKP、A-chE和SOD的活力变化趋势与24 h的变化趋势大致相同,但活性显著减弱,牡蛎的累计死亡率与对照组相比显著上升。以上结果表明,随着微塑料浓度的增加和暴露时间的延长,牡蛎的抗菌能力和免疫能力均呈下降趋势。
  • 图 1  微塑料胁迫24 h后近江牡蛎的免疫指标活力

    Figure 1.  Immune index in oysters (C. ariakensis) under microplastics stress for 24 h

    图 2  微塑料胁迫24 h后近江牡蛎体内AKP活力和MDA含量

    Figure 2.  Activities of AKP and content of MDA in oysters (C. ariakensis) under microplastics stress for 24 h

    图 3  微塑料胁迫72 h后近江牡蛎的免疫指标活力

    Figure 3.  Immune index in oysters (C. ariakensis) under microplastics stress for 72 h

    图 4  微塑料胁迫72 h后近江牡蛎体内AKP活力 和MDA 含量

    Figure 4.  Activities of AKP and content of MDA in oysters (C. ariakensis) under microplastics stress for 72 h

    图 5  微塑料胁迫对近江牡蛎累计死亡率的影响

    Figure 5.  Effects of microplastic stress on cumulative mortality of oysters (C. ariakensis)

  • [1] RICHARD C, THOMPSON Y O R P. Lost at sea where is all the plastic[J]. Science, 2004, 304(5672): 838. doi: 10.1126/science.1094559
    [2] AUTA H S, EMENIKE C U, FAUZIAH S H. Distribution and importance of microplastics in the marine environment: A review of the sources, fate, effects, and potential solutions[J]. Environment international, 2017, 102: 165-176. doi: 10.1016/j.envint.2017.02.013
    [3] CANESI L, CIACCI C, FABBRI R, et al. Bivalve molluscs as a unique target group for nanoparticle toxicity[J]. Marine Environmental Research, 2012, 76: 16-21. doi: 10.1016/j.marenvres.2011.06.005
    [4] WANG R, MOU H, LIN X, et al. Microplastics in Mollusks: Research Progress, Current Contamination Status, Analysis Approaches, and Future Perspectives[J]. Frontiers in Marine Science, 2021, 8: 759919. doi: 10.3389/fmars.2021.759919
    [5] TENG J, ZHAO J, ZHU X, et al. Toxic effects of exposure to microplastics with environmentally relevant shapes and concentrations: Accumulation, energy metabolism and tissue damage in oyster Crassostrea gigas[J]. Environmental Pollution, 2021, 269: 116169. doi: 10.1016/j.envpol.2020.116169
    [6] Van CAUWENBERGHE L, JANSSEN C R. Microplastics in bivalves cultured for human consumption[J]. Environmental Pollution, 2014, 193: 65-70. doi: 10.1016/j.envpol.2014.06.010
    [7] JIANG P, ZHAO S, ZHU L, et al. Microplastic-associated bacterial assemblages in the intertidal zone of the Yangtze Estuary[J]. Science of The Total Environment, 2018, 624: 48-54. doi: 10.1016/j.scitotenv.2017.12.105
    [8] FRERE L, MAIGNIEN L, CHALOPIN M, et al. Microplastic bacterial communities in the Bay of Brest: Influence of polymer type and size[J]. Environmental Pollution, 2018, 242: 614-625. doi: 10.1016/j.envpol.2018.07.023
    [9] WANG D, SU L, RUAN H D, et al. Quantitative and qualitative determination of microplastics in oyster, seawater and sediment from the coastal areas in Zhuhai, China[J]. Marine pollution bulletin, 2021, 164: 112000. doi: 10.1016/j.marpolbul.2021.112000
    [10] MILLER G. Reactive oxygen signaling and abiotic stress[J]. Physiologia Plantarum, 2008, 133(3): 481-489. doi: 10.1111/j.1399-3054.2008.01090.x
    [11] WEBB S, GAW S, MARSDEN I D, et al. Biomarker responses in New Zealand green-lipped mussels Perna canaliculus exposed to microplastics and triclosan[J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2020, 201: 110871. doi: 10.1016/j.ecoenv.2020.110871
    [12] XIANG N, ZHAO C F, DIAO X P, et al. Dynamic responses of antioxidant enzymes in pearloyster Pinctada martensii exposed to di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP)[J]. Environmental Toxicology and Pharmacology, 2017, Sep;54: 184-190.
    [13] TLILI S, JEMAI D, BRINIS S, et al. Microplastics mixture exposure at environmentally relevant conditions induce oxidative stress and neurotoxicity in the wedge clam Donax trunculus[J]. Chemosphere, 2020, 258: 127344. doi: 10.1016/j.chemosphere.2020.127344
    [14] OLIVEIREA P, BARBOZA L G A, BRANCO V, et al. Effects of microplastics and mercury in the freshwater bivalve Corbicula fluminea (Müller, 1774): Filtration rate, biochemical biomarkers and mercury bioconcentration[J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2018, 164: 155-163. doi: 10.1016/j.ecoenv.2018.07.062
    [15] BRANDTS I, TELES M, GONCALVES A P, et al. Effects of nano-plastics on Mytilus galloprovincialis after individual and combined exposure with carbamazepine[J]. The Science of the total environment, 2018, 643: 775-784. doi: 10.1016/j.scitotenv.2018.06.257
    [16] 梁 箫, 张 亚, 刘钰珠, 等. 灿烂弧菌对厚壳贻贝免疫指标和消化酶活性的影响[J]. 水产学报, 2018, 42(09): 1438-1445.
    [17] TANG Y, RONG J, GUAN X, et al. Immunotoxicity of microplastics and two persistent organic pollutants alone or in combination to a bivalve species[J]. Environmental pollution (1987), 2020, 258: 113845. doi: 10.1016/j.envpol.2019.113845
    [18] RAHMAN M F, SIDDIQUI M K J. Biochemical effects of vepacide (from Azadirachta indica) on Wistar rats during subchronic exposure[J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2004, 59(3): 332-339. doi: 10.1016/j.ecoenv.2003.07.013
    [19] 陈 萍, 王清印, 李 健, 等. 溶藻弧菌对三疣梭子蟹溶菌酶和磷酸酶活性的影响[J]. 渔业科学进展, 2009, 30(02): 78-82. doi: 10.3969/j.issn.1000-7075.2009.02.013
    [20] 陈孟玲, 高 菲, 王新元, 等. 微塑料对黑海参(Holothuria atra)免疫和消化生理的影响[J]. 海洋科学, 2021, 45(04): 126-135.
    [21] TENG J, ZHAO J, ZHU X, et al. Oxidative stress biomarkers, physiological responses and proteomic profiling in oyster (Crassostrea gigas) exposed to microplastics with irregular-shaped PE and PET microplastic[J]. Science of The Total Environment, 2021, 786: 147425. doi: 10.1016/j.scitotenv.2021.147425
    [22] PAUL-PONT I, LACROIX C, GONZÁLEZ FERNÁNDEZ C, et al. Exposure of marine mussels Mytilus spp. to polystyrene microplastics: Toxicity and influence on fluoranthene bioaccumulation[J]. Environmental Pollution, 2016, 216: 724-737. doi: 10.1016/j.envpol.2016.06.039
    [23] SONG J A, CHOI C Y, PARK H. Exposure of bay scallop Argopecten irradians to micro-polystyrene: Bioaccumulation and toxicity[J]. Comparative biochemistry and physiology. Toxicology & pharmacology, 2020, 236: 108801.
    [24] SIKDOKUR E, BELIVERMIS M, SEZER N, et al. Effects of microplastics and mercury on manila clam Ruditapes philippinarum: Feeding rate, immunomodulation, histopathology and oxidative stress[J]. Environmental pollution (1987), 2020, 262: 114247. doi: 10.1016/j.envpol.2020.114247
    [25] ZETTLER E R, MINCER T J, AMARAL-ZETTLER L A. Life in the “Plastisphere”: Microbial Communities on Plastic Marine Debris[J]. Environmental Science & Technology, 2013, 47(13): 7137-7146.
  • [1] 董兰芳许明珠李世才陈瑞芳龙子扬林立蔚 . 温度对中国鲎幼鲎生长、蜕壳、能值、免疫指标和抗氧化能力的影响研究. 海洋环境科学, 2023, 42(1): 104-110. doi: 10.12111/j.mes.2021-x-0187
    [2] 康子歆林健晖杨涛翚广能廖武森曾映旭 . 不同官能团纳米塑料在波纹巴非蛤体内的蓄积特征及毒性效应. 海洋环境科学, 2023, 42(3): 362-368. doi: 10.12111/j.mes.2022-x-0118
    [3] 张嘉戌柳青张承龙邓义祥安立会 . 海洋塑料和微塑料管理立法研究. 海洋环境科学, 2019, 38(2): 167-177. doi: 10.12111/j.mes20190202
    [4] 冯杰尹卓许春阳曾劼张琪琪刘静杨蕤 . 基于传输路径的秦皇岛海域微塑料分布特征调查. 海洋环境科学, 2023, 42(1): 80-88. doi: 10.12111/j.mes.2022-x-0090
    [5] 陈永平姜璐许春阳李昊刘静 . 东中国海表层海水微塑料分布特征及其来源综述. 海洋环境科学, 2023, 42(2): 315-325. doi: 10.12111/j.mes.2022-x-0095
    [6] 张明兴刘全斌杜美佳丛艺靳非张微微王莹王菊英 . 海洋浮游动物体内微塑料硝酸提取方法研究. 海洋环境科学, 2023, 42(3): 336-344. doi: 10.12111/j.mes.2022-x-0300
    [7] 边伟杰吕淑果史云峰曾映旭孙睿王辛鑫刘敏 . 海南岛南部海湾潮间带沉积物微塑料赋存特征及其风险评估. 海洋环境科学, 2023, 42(3): 345-353. doi: 10.12111/j.mes.2022-x-0133
    [8] 杨涵沈家顺李其沛赵洪伟 . 万泉河流域表层水体和沉积物中微塑料的污染特征. 海洋环境科学, 2023, 42(): 1-10. doi: 10.12111/j.mes.2023-x-0183
    [9] 彭修强张刚闫玉茹姚才华刘群汤倩梁飞刚 . 江苏盐城滨海湿地表层沉积物微塑料分布特征及生态风险评估. 海洋环境科学, 2024, 43(2): 1-9. doi: 10.12111/j.mes.2023-x-0204
    [10] 董晓丁海兵乔馨越李琪 . 聚苯乙烯微塑料对杜氏盐藻生长及低分子量有机酸释放的影响研究. 海洋环境科学, 2024, 43(2): 1-10. doi: 10.12111/j.mes.2023-x-0108
    [11] 易先亮严明游奎 . 轮胎磨损颗粒渗滤液对海蜇螅状体的毒性鉴别评价研究. 海洋环境科学, 2023, 42(3): 354-361. doi: 10.12111/j.mes.2023-x-0040
    [12] 古小莉徐瑞文李惠青段星星张安凯黄珂 . 广东沿海养殖牡蛎中副溶血性弧菌的污染状况、毒力基因及耐药性分析. 海洋环境科学, 2022, 41(6): 865-871. doi: 10.12111/j.mes.2022-x-0025
    [13] 王菊英 . 海洋微塑料研究的进展与思考. 海洋环境科学, 2023, 42(3): 333-335. doi: 10.12111/j.mes.002
    [14] 羊童林朗裘文慧徐向荣 . 基于物种敏感度分布的微塑料生态毒性评估:挑战与思考. 海洋环境科学, 2024, 43(2): 1-3. doi: 10.12111/j.mes.2023-x-0313
    [15] 赵越周春艳许春阳 . 胶州湾微塑料迁移分布特性数值模拟研究. 海洋环境科学, 2024, 43(2): 1-10. doi: 10.12111/j.mes.2023-x-0152
    [16] 韩蕾赵芮刘昭贾宝林姜祖林冯少姝梁玉波 . 大田软海绵酸和鳍藻毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制与应用. 海洋环境科学, 2022, 41(5): 783-790. doi: 10.12111/j.mes.2021-x-0194
    [17] 林金兰赖廷和陈圆曹庆先何斌源 . 北海市国家级海洋生态文明建设示范区建设评估指标构建探析. 海洋环境科学, 2018, 37(6): 871-878. doi: 10.12111/j.mes20180611
    [18] 徐冠球谭晓璇屠建波石海明何荣刘洋 . 天津大神堂牡蛎礁保护区海域海水水质变化趋势分析与评价. 海洋环境科学, 2022, 41(4): 554-562. doi: 10.12111/j.mes2021-x-0051
    [19] 周志伟邓化施华宏 . 基于无人机遥感与机器学习的岸滩大型塑料垃圾监测方法. 海洋环境科学, 2023, 42(1): 141-150. doi: 10.12111/j.mes.2021-x-0311
    [20] 张秀丽甄毓张鑫景宗学华金来刘浩源 . 聚苯乙烯纳米塑料对中肋骨条藻的毒性效应. 海洋环境科学, 2024, 43(2): 1-8. doi: 10.12111/j.mes.2023-x-0234
  • 加载中
图(5)
计量
  • 文章访问数:  2838
  • HTML全文浏览量:  581
  • PDF下载量:  60
出版历程
  • 收稿日期:  2021-10-16
  • 录用日期:  2022-02-07
  • 刊出日期:  2022-06-20

微塑料胁迫对近江牡蛎免疫及抗菌力的影响

    作者简介:牟红莉(1996-),女,四川眉山人,硕士研究生,主要从事微塑料对贝类的污染研究,E-mail: 2797678008@qq.com
    通讯作者: 王瑞旋,女,副研究员,主要从事贝类微生态研究,E-mail: wangruixuan@scsfri.ac.cn
  • 1. 上海海洋大学 海洋科学学院 上海 201306
  • 2. 韩山师范学院 生命科学与食品工程学院, 广东 潮州 521041
  • 3. 华南农业大学 海洋学院, 广东 广州 510642
  • 4. 惠州学院 生命科学学院, 广东 惠州 516007
基金项目: 国家自然科学基金项目(31902416)

摘要: 为探究微塑料对近江牡蛎 (Crassostrea ariakensis)免疫及抗菌力的影响,本研究将不同浓度(0.05 mg/L、0.5 mg/L、5 mg/L)的聚苯乙烯微塑料—菌悬液注入牡蛎壳腔内,研究牡蛎在胁迫24 h和72 h后鳃组织中6种免疫指标的活力,同时记录死亡率。结果显示,微塑料胁迫24 h后,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力随暴露浓度的升高而升高,但一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,A-chE)随暴露浓度升高被显著抑制,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活力仅在0.5 mg/L处理下显著上升,过氧化氢酶(catalase,CAT)的活力呈现先上升再下降后上升的趋势。微塑料胁迫72 h后,CAT、AKP、A-chE和SOD的活力变化趋势与24 h的变化趋势大致相同,但活性显著减弱,牡蛎的累计死亡率与对照组相比显著上升。以上结果表明,随着微塑料浓度的增加和暴露时间的延长,牡蛎的抗菌能力和免疫能力均呈下降趋势。

English Abstract

  • 微塑料通常指直径小于5 mm的塑料颗粒[1]。据统计,塑料垃圾占海洋垃圾总量的80%~85%,并以每年480~1270万吨的速度增长[2]。研究表明,在中国沿海城市的贻贝和养殖牡蛎中均发现了微塑料的存在[3]。微塑料尺寸较小,被贝类误食后进入消化组织,导致贝类机体出现能量和脂质等代谢异常,影响贝类的生殖、免疫和神经系统[4-5]。以欧洲市售的紫贻贝(Mytilus edulis)和太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)中发现的微塑料数量进行估算,欧洲贝类消费者每年通过饮食可摄入11000个微塑料颗粒[6]。由此可见,贝类体内携带的微塑料和人类的生活及健康密切相关。

    微塑料的比表面积较大,可作为微生物(细菌、病毒)的载体[7],使微生物具有更强的耐受力。研究表明,在微塑料中检出的弧菌约77%是具有潜在致病性的病原菌,如河口弧菌(Vibiro aestuarianus)和灿烂弧菌(V. splendidus[8]。与其他海洋生物相比,贝类拥有的开放式循环系统和特殊摄食方式(过滤水体)使贝类更容易接触和富集环境中的污染物。因此,双壳贝类被广泛用于监测持久性环境污染物(如微塑料)[9]。近江牡蛎(C. ariakensis)属于典型的双壳贝类,是我国重要的经济品种,主要生长在我国河口水域,在贝类产业中占据重要的地位。因此,本研究选用近江牡蛎作为实验生物,将其进行微塑料与哈维弧菌(V. harveyi)联合暴露,通过累计死亡率以及鳃组织中的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,A-chE)的活力变化,探究聚苯乙烯微塑料对近江牡蛎免疫力和抗菌力的影响,以期为微塑料对滤食性贝类的潜在风险评估提供参考数据。

    • 近江牡蛎(壳长约为6.6 cm) 采自广东省惠州市牡蛎养殖区。实验前暂养7 d,盐度为20,水温为(24±1)℃。暂养期间,在牡蛎侧边开一小孔以便后期推注聚苯乙烯微塑料溶液。

      聚苯乙烯微塑料购于上海麦克林生化科技有限公司,粒径为4 μm。实验所用哈维弧菌为中国水产科学研究院南海水产研究所实验室保存菌种。

    • 使用BHI固体培养基平板(含1.5%的NaCl,下同)对受试病原哈维弧菌菌株进行活化,培养18 h后挑取单菌落于BHI斜面培养基上,培养18 h后用灭菌PBS洗涤沉淀,重复3次,经比浊法计数,调整菌浓度为5×108 CFU/mL。

      实验组设置3个聚苯乙烯微塑料浓度:0.05 mg/L、0.5 mg/L、5 mg/L,以哈维弧菌菌悬液作为稀释液;另设一个空白对照组,以生理盐水作为稀释液,每组3个重复。

      选取144只健康的近江牡蛎,在每个玻璃缸(容积为120 L)中随机放入12只牡蛎。通过侧边的小孔推注聚苯乙烯微塑料—菌悬液到牡蛎体腔,推注时注意不要伤及肌肉组织,推注剂量为1 mL/只。记录牡蛎死亡率,在干露胁迫24 h和72 h后,每组随机取3只牡蛎测定其酶活力。

    • 对牡蛎进行解剖,取其鳃组织,用预冷的PBS缓冲液清洗,经液氮速冻后转移至−80 ℃冰箱保存。

    • 按重量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例加入9倍体积的匀浆介质(生理盐水)到待测样品中,制成10%的匀浆,3500 r/min离心10 min,取上清液。用试剂盒(购于南京建成生物工程研究所)分别检测近江牡蛎的总蛋白含量(用于计算相关酶活力)及AKP、MDA、SOD、CAT、NOS、A-chE的活力,实验操作均按照试剂盒说明书进行。

    • 用SPSS 22.0对数据进行统计分析,数据以平均值±标准偏差(x±SD)表示。微塑料对牡蛎各指标的影响采用单因素方差(One-way ANOVA)和LSD多重比较进行统计学分析,以P<0.05作为差异显著的标志。

    • 微塑料胁迫24 h后,近江牡蛎CAT、SOD、A-chE和NOS的活力变化如图1所示。随着微塑料浓度的增加,CAT活力虽呈现先上升再下降后上升的趋势,但所有实验组的CAT活力仍高于对照组,SOD活力显著上升(P<0.05)。SOD-CAT 系统是抗氧化防御系统的第一道防线,能增强吞噬细胞的防御能力和机体的免疫功能[10]。SOD催化超氧阴离子歧化为分子氧和过氧化氢,CAT则进一步催化过氧化氢分解成无毒害作用的氧和水,阻止其转化为活性更高的羟自由基。Webb[11] 等发现,绿唇贻贝(Perna canaliculus)暴露在添加有三氯生(triclosan)的微塑料环境中,机体SOD活力增强,同时伴随脂质过氧化现象。SOD 在清除超氧阴离子的过程中产生的过氧化氢会调动CAT 的活力,但大量的超氧阴离子会抑制CAT 活力[12],使CAT活力增长减缓甚至下降,从而维持机体内免疫酶的动态平衡。

      图  1  微塑料胁迫24 h后近江牡蛎的免疫指标活力

      Figure 1.  Immune index in oysters (C. ariakensis) under microplastics stress for 24 h

      本研究中,随着微塑料浓度的增加,A-chE活力呈现显著降低的趋势(P<0.05)。有报道指出,截形斧蛤(Donax trunculus)在聚乙烯和聚丙烯的联合暴露下,其鳃、消化腺以及肌肉中的A-chE活力显著下降[13];在河蚬(Corbicula fluminea[14]、地中海贻贝(M. galloprovincialis[15]中也发现微塑料抑制A-chE活力的现象,与本实验结果类似。这表明,微塑料确实可引起A-chE活力明显下降,并通过免疫细胞胞膜上的乙酰胆碱受体调节机体的免疫应答能力。

      本实验进一步分析了诱导型(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和结构型(structural nitric oxide synthase,cNOS)一氧化氮合成酶对微塑料浓度的响应。研究发现,当微塑料浓度高于0.5 mg/L时,iNOS和cNOS受到显著影响(P<0.05),NOS的活力随微塑料浓度的上升呈现降低的趋势。NOS能合成一氧化氮,发挥巨噬细胞的功能,参与贝类免疫防御。例如,厚壳贻贝(M. coruscus)在灿烂弧菌(V. splendidus)的刺激下,NOS含量显著升高[16]。NOS需要高浓度的Ca2+/CaM催化才可合成一氧化氮,但微塑料能降低细胞内Ca2+浓度[17],导致一氧化氮合成受阻。因此,本研究中,NOS活力随微塑料浓度升高而下降,牡蛎机体的免疫能力逐渐减弱。

      微塑料胁迫24 h后,牡蛎体内AKP活力和MDA含量变化如图2所示。当微塑料浓度为0.5 mg/L时,牡蛎体内AKP活力与对照组存在显著差异(P<0.05)。AKP主要参与解毒、大分子的代谢和生物合成、调节膜运输、参与转磷酸作用等多种代谢过程,是海洋无脊椎动物重要的溶酶体酶[18]。溶藻弧菌(V. alginolyticus)感染三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)后,AKP活力随感染时间延长而逐渐减弱[19],黑海参(Holothuria atra)暴露在聚苯乙烯环境下,AKP活力呈现先升后降的趋势[20]。而本研究中,AKP活力呈先下降后上升再下降的趋势,与上述研究结果不同。推测在微塑料浓度较低时,AKP受弧菌因素影响较大,而随着微塑料浓度的增加,微塑料对牡蛎机体的影响逐渐扩大,导致AKP活力上调。

      图  2  微塑料胁迫24 h后近江牡蛎体内AKP活力和MDA含量

      Figure 2.  Activities of AKP and content of MDA in oysters (C. ariakensis) under microplastics stress for 24 h

      随着微塑料浓度的增加,牡蛎体内MDA含量持续上升。MDA是当生物体受到污染物胁迫时,产生的脂质过氧化代谢产物,可以反映生物体氧化损伤程度。已有研究证实,太平洋牡蛎(C. gigas)暴露在聚对苯二甲酸乙二醇酯和聚乙烯中,其体内的MDA含量升高[21];在翡翠贻贝(Perna canaliculus[11]和贻贝属(Mytilus spp.)[22]中也发现微塑料使机体出现脂质过氧化的现象。本研究中,近江牡蛎体内MDA含量随微塑料浓度升高而持续增加,表明微塑料浓度的升高可进一步损伤牡蛎的脂质。

    • 微塑料胁迫72 h后,CAT、SOD、A-chE和NOS的活力变化如图3所示。随着微塑料浓度的升高,CAT活力变化不明显,但所有实验组的CAT活力均高于对照组,而SOD的活力则呈现缓慢上升趋势。有研究指出,贝类CAT和SOD等抗氧化酶的表达量会随聚苯乙烯微塑料浓度的增加而增加[23]。A-chE呈下降趋势,机体通过抑制A-chE的活力来调节自身免疫力。NOS活力呈先增加后下降的趋势,表明微塑料降低了机体抵抗病原弧菌的能力。

      图  3  微塑料胁迫72 h后近江牡蛎的免疫指标活力

      Figure 3.  Immune index in oysters (C. ariakensis) under microplastics stress for 72 h

      微塑料胁迫72 h后, AKP活力和MDA含量变化如图4所示。AKP活力呈先降后升再降的趋势,但仍低于对照组,而MDA含量则呈上升的趋势。已有研究表明,微塑料影响溶酶体膜的稳定性[24],从而使AKP 活力受到限制。当微塑料持续作用于近江牡蛎时,其MDA含量不断上升,表明机体脂质损伤不断加重。

      微塑料胁迫72 h后,CAT、AKP、A-chE和SOD的变化趋势与胁迫24 h的趋势大致相同,但活力显著降低(P<0.05)。近江牡蛎对短期的微塑料胁迫可以通过启动应激防御系统来降低微塑料对自身的伤害,但随着微塑料胁迫时间的延长,超出牡蛎的承受范围,机体则可能受到损伤;另外,牡蛎自身能量存储不足可能导致机体对酶的合成能力不断下降,从而影响机体正常的生理活动。

      图  4  微塑料胁迫72 h后近江牡蛎体内AKP活力 和MDA 含量

      Figure 4.  Activities of AKP and content of MDA in oysters (C. ariakensis) under microplastics stress for 72 h

    • 微塑料胁迫对近江牡蛎抗菌力的影响如图5所示。随着微塑料浓度的增加,近江牡蛎的累计死亡率逐渐升高,并且结果显示,牡蛎的抗菌力与微塑料浓度呈正相关关系(R2为0.95)。其中,当微塑料浓度达到0.5 mg/L时,牡蛎的死亡率显著高于对照组(P<0.05)。

      图  5  微塑料胁迫对近江牡蛎累计死亡率的影响

      Figure 5.  Effects of microplastic stress on cumulative mortality of oysters (C. ariakensis)

      已有研究表明,在生物体内不断累积的微塑料不仅造成宿主组织损伤,还可成为条件致病菌的载体[25]。本研究分析了在微塑料胁迫下牡蛎机体对哈维弧菌的抵抗力变化情况。结果显示,随着微塑料浓度的增加,牡蛎体内的免疫酶活力下降,其死亡率升高,可见,当微塑料存在于牡蛎体内时,牡蛎机体对哈维弧菌的抵抗力下降。

    • (1) 不同浓度(0.05 mg/L、0.5 mg/L、5 mg/L)的聚苯乙烯微塑料—菌悬液注入近江牡蛎壳腔内后,其体内MDA含量和SOD活力随微塑料浓度的升高而上升,但A-chE和NOS活力则随微塑料浓度的上升而显著下降,AKP活力仅在微塑料胁迫浓度为0.5 mg/L时显著上升。而CAT的活力呈先上升再下降然后再上升的趋势。结果表明,微塑料浓度的上升加剧了牡蛎的氧化应激反应。

      (2)当微塑料胁迫时间由24 h延长至72 h时,CAT、AKP、A-chE和SOD的活力减弱,脂质损伤程度加剧,死亡率不断上升。以上现象表明,微塑料胁迫可导致牡蛎机体免疫力下降。

参考文献 (25)

目录

    /

    返回文章